El sistema de PCR digital en gotas o tecnología de Droplet Digital PCR (ddPCR) proporciona una cuantificación absoluta de las moléculas de DNA con una inigualable precisión, exactitud y sensibilidad para aplicaciones cuantitativas de PCR. El sistema Droplet Digital PCR es una tecnología de tercera generación y proporciona un alcance revolucionario en la cuantificación del DNA blanco con una precisión y sensibilidad sin igual utilizando químicas como EvaGreen o Sondas TaqMan. Entre las ventajas de la tecnología ddPCR se encuentran:
• Mayor proporción de señal con respecto al ruido- Un alto número de copias y la fluorescencia de fondo se diluyen, con lo que se logra enriquecer los blancos poco comunes y con ello lograr una precisión de ± 10%
• El intervalo de error se reduce con respecto al PCR en tiempo real- Se reducen considerablemente las proporciones de error al eliminar la eficiencia de amplificación y permitiendo la detección de un pequeño incremento (1.25) de señal.
• Cuantificación simplificada- ddPCR no requiere de una curva estándar de calibración o de la selección de genes de referencia para normalización, no se utilizan valores de Ct.
• Productos amplificados de un sólo templado- Los productos generados por amplificación provienen exclusivamente de un sólo templado.
El principio teórico del funcionamiento de este sistema se basa en la formación y análisis de fluorescencia de miles de nanogotas construidas por un aceite especial que encapsula reactivos y muestra de DNA previamente amplificado por PCR. El sistema ddPCR mide la fluorescencia de toda la población de gotas para determinar con ello los positivos y negativos con lo que se obtiene una cuantificación absoluta del material genético analizado. Se pueden identificar los fluoroforos FAM, HEX, VIC y y EvaGreen, no se requiere construir una curva estándar para hacer la cuantificación, con lo que se disminuye el porcentaje de error de la medición.
El estudio de terapia de VIH de Dr. Sangamo demuestran cómo la tecnología ddPCR puede aplicarse para aplicaciones de detección de eventos raros de pocas copias en los estudios clínicos. El sistema QX100 juega un papel central en la investigación de la compañía, que proporciona, datos reproducibles de alta precisión en apoyo del desarrollo cura funcional.
"Desde la adquisición de la QX100, hemos estado más seguros en lo que los ensayos nos están diciendo. Nos quedamos sorprendidos de lo fácil, preciso y reproducible de los eventos de bajas copias por cada muestra de ADN genómico", segun Dr. Lee. y el Dr. Sangamo "Somos capaces de generar datos que son mucho más exacto para nuestra investigación."
Investigacion en VIH: Droplet Digital™ PCR Opens New Perspectives in HIV Research
