Entender los picos es la clave del éxito para la cromatografía experimental.
En esta publicación podremos encontrar algunas definiciones básicas relacionadas a los términos que abarcan la lectura de Picos; como que se puede determinar con los picos y que cosas te pueden decir los Picos acerca de la calidad del empaque de tu columna, la eficiencia en tu separación y la calidad de la purificación hecha por la separación.
Área del Pico
El área que está debajo de la curva de la lectura espectrofotométrica a la línea base, está directamente relacionado con la cantidad de producto obtenido.
Tiempo de retención del Pico
El tiempo que toma a un Pico salir de la columna. Usualmente es medido desde el inicio de la corrida (no necesariamente de la inyección), hasta la Aparicio en vértice del pico en el cuadro espectrofotométrico, del Pico de interés. Aunque el método más usual es de medición de este tiempo es desde la inyección hasta la aparición del Pico.
Volumen de retención
El volumen de líquido requerido para llevar a cabo una elución del Pico atreves de la columna. El método más común es el medir el volumen desde inyección hasta la aparición del Pico. O medir el volumen desde el inicio de corrida hasta la aparición del pico.
Altura del Pico
La distancia entre la línea base o fondo y el vértice del Pico. El fondo o base es tomado desde el inicio del cero espectrofotométrico de la lectura base de referencia.
Área Relativa
El porcentaje del área total de lectura del Pico de interés, representado como un área de un solo Pico. Este es utilizado para revisar el campo total, la pureza o nivel de contaminación.
Punto de Inyección
El tiempo en el cual la muestra es inyectada en la comuna. Cuando se usa un “Loop” o tubo de contención de muestra, y esta se suelta en el torrente de arrastre del liquido de elución o fase móvil. Este momento es el punto cero hasta la medida del Pico, para el tiempo de retención.
Volumen retardado
El volumen en el tubo de conexión entre el sistema cromatografico y el colector de fracciones. Este valor de volumen es importante pues con este se corrobora que los volúmenes colectados corresponden al pico mostrado.
Resolución de Pico
Aunque se tiene de por medio una ecuación matemática para definir la resolución de Picos, la manera más práctica de entenderlos es como la distancia entre los vértices de Picos vecinos.
Ancho a media altura
La medida de la eficiencia de separación de fracciones. A menor el valor, más delgada será el área del pico, obteniéndose una mejor separación en una columna muy eficiente. En general, una columna con esferas más pequeñas tendrá valores menores, proporcional a la anchura del pico a media altura.
Anatomía de un Pico
Asimetria de Pico
El factor de asimetría, definida como la relación entre distancia desde la línea central del pico a la pendiente de bajada, entre la distancia desde la línea central del pico a la pendiente de subida. En general, es una medida de la calidad de la columna. Columnas tendrán un valor cerca de 1. Todas las mediciones se hacen en el 10% de la altura máxima de pico.
Pureza (usando el área del Pico)
La pureza de una muestra puede ser estimada directamente desde una cromatografía comparando el área del Pico para el pico de interés en comparación a los demás Picos que puedan mostrarse en el cromatograma. Esto es usualmente expresado en porcentaje comparativo del área total de todos los Picos del cromatograma contra el área del Pico de interés. Pureza medida por área del pico sólo tomará en cuenta los niveles de pureza contra los productos que absorben en la longitud de onda utilizada para la detección.
Hombros
Los Picos de los cromatogramas exhiben hombros cuando se tiene una pobre separación de productos, o las eluciones se han dado simultáneamente en la columna, productos secundarios de similares propiedades y lectura espectrofotométrica cercana eluyen de manera paralela y son leídos en forma continua al Pico de interés. Esto exige que el método cromatografico sea optimizado, la pureza sea mayor, así el Pico de interés se exprese solo en el cromatograma.
